Assassin's Creed II es el segundo juego de la franquicia de Assassin's Creed. El juego fue lanzado el 17 de noviembre del 2009 para USA y el 20 de noviembre para todo el mundo, en las plataformas PS3 y Xbox. La historia se sitúa en la Italia Renacentista y tiene como protagonista a Ezio Auditore otro ancestro de Desmond Miles.
Assassin's Creed II es similar a su predecesor en varios aspectos: ambos se consideran juegos de estilo "sandbox", debido a que no es lineal, y el jugador puede explorar libremente los diversos emplazamientos de Italia. El Animus 1.28 usado por Abstergo, es reemplazado por una versión actualizada, el Animus 2.0, que además de poder revivir las memorias de los antepasados del sujeto, da información histórica adicional de lugares, personas, servicios, y glifos.
La vista de Águila ha sido actualizada: ahora, se muestra en una perspectiva en tercera persona, que puede ser usada incluso cuando Ezio se mueva. Leonardo da Vinci aparece en el juego como traductor de las páginas del Códice de Altaïr Ibn-La'Ahad, además de proporcionar a Ezio diversas mejoras en sus armas. Las armas como espadas y dagas pueden ser obtenidas mediante un nuevo sistema económico implementado en el juego. La exploración también ha sido actualizada; ahora el Ancestro puede nadar en el agua, además de poder usar góndolas o montar a caballos, junto con una máquina voladora realizada por el propio Leonardo da Vinci.
En Monteriggioni, la Villa Auditore actúa como la fortaleza de Ezio en el juego. Un nuevo sistema económico ha sido implementado causando que Ezio reciba dinero cada 20 minutos. A medida que las tiendas sean actualizadas, se ofrecerán descuentos en armaduras, armas, cuadros, bolsas y medicinas que compre. La ciudad esconde a su vez diversos objetos que también aumentan los ingresos obtenidos. Al obtenerlos, estos objetos serán colocados en diversos lugares de la Villa, muy parecido a que se desbloquean cuadros de las víctimas de Ezio en su habitación después de asesinarlas.
El sistema de combate ha sido ampliado, añadiendo acciones como desarmar a los enemigos. También, Ezio podrá usar más recursos para esconderse, como bucear en el agua para romper la visión del enemigo o juntarse con cualquier grupo de individuos, que, a diferencia del primer juego, no son personas concretas. Ezio es capaz de aprender más métodos de Asesinato, como asesinar desde un escondite o incluso arrojar a sus enemigos por los tejados para así morir por la caída. En adición, ahora hay más tipos de guardias, unos más ágiles y otros más fuertes. Ahora Ezio es capaz de arrojar bombas de humo, contratar los servicios de cortesanas, ladrones y mercenarios para pasar desapercibido por una zona sin alertar a los guardias. La salud es medida con la sincronización, y las heridas leves se van curando por sí solas,pero las heridas graves requieren la atención de un médico, que puede suministrar a Ezio medicinas para sanarse.
El juego incluye también un sistema de notoriedad, que, dependiendo de nuestro comportamiento, la zona en la que estemos, o la misión que estemos jugando, Ezio será más reconocido por los habitantes de esa ciudad, especialmente por los guardias. Cuando el icono de notoriedad esté vacío, Ezio pasará desapercibido, y los guardias no lo perseguirán, a no ser que cometa un acto delictivo. Mientras el jugador realice comportamientos "socialmente-inaceptados", debido a una misión, los guardias serán propensos a perseguir a Ezio e intentar matarle. Para reducir la notoriedad, se podrán hacer 3 acciones distintas: arrancar carteles, lo cual quita un 25% de notoriedad; sobornar a los heraldos de la ciudad, lo cual reduce un 50 % de notoriedad; y matar a oficiales corruptos, lo cual reduce la notoriedad un 75 %. Cabe destacar que los oficiales solo aparecerán cuando Ezio lleve bastante notoriedad acumulada. El sistema de notoriedad es diferente en cada ciudad del juego, permitiendo a Ezio pasar desapercibido en un lugar, pero ser completamente conocido en otro.
Como su predecesor, el juego tiene un sistema de parkour que permite al jugador escalar edificios altos, y cuando esté en la cima, poder realizar (en algunos casos) un salto de fe. La escalada ha sido actualizada con un nuevo movimiento, el salto de pared, que permite a Ezio llegar a zonas que antes eran inalcanzables.
Se le ha añadido al juego un sistema de día y noche, el cual permite al jugador explorar las áreas tanto cuando hay luz solar o cuando el sol se pone. En adición, algunas misiones se juegan en ciertos momentos del día o la noche.
Debido a las quejas de simplicidad de las misiones del primer juego, el sistema de misiones de Assassin's Creed II ha sido expandido, hasta poder tener un total de 200 misiones disponibles, la mitad de ellas siendo las misiones principales del juego. Las misiones secundarias incluyen la exploración de ciertas áreas, cuyo éxito premian a Ezio con un sello de Asesino. Una vez conseguidos los seis sellos repartidos por todo el mapa, Ezio podrá reclamar la armadura de Altaïr.
El juego también introduce un sistema de Glitches de manera similar a su antecesor, donde si se presiona cierto botón en el momento adecuado de una cinemática, creara cambios específicos y acciones durante la escena.